
Short Oligonucleotide Arrays Scurt Oligonucleotide Array
Short Oligonucleotide DNA Microarrays : Scurt Oligonucleotide ADN Microarrays:
Short Oligonucleotide arrays are created using in-situ photolithographic synthesis Scurt Oligonucleotide arrays sunt create utilizând in-situ photolithographic sinteza
25-mer oligos are chemically synthesized onto glass slides using photolithographic methods pioneered originally by Affymetrix. Digitally controlled micro-mirrors are now used in the photolithographic printing technique. 25-mer oligos sunt sintetizate chimic diapozitive pe sticlă photolithographic folosind metode pioneered inițial de către Affymetrix. Digitally controlate de micro-oglinzile retrovizoare sunt acum folosite în photolithographic de imprimare tehnica.
Glass slides are coated with synthetic linkers which contain photo-labile chemical groups. Masks are used to direct light to pre-determined positions on the slide and this removes exposed groups. Sticla diapozitivele sunt acoperite cu linkers sintetice, care conțin foto-chimice labile grupuri. Masti sunt utilizate pentru a lumina directă a pre-determinat poziții cu privire la acest diapozitiv și grupurilor expuse elimină. The unprotected groups can then be coupled with bi-functional deoxy-nucleotide triphosphates dNTPs. Neprotejat de grupuri pot fi, apoi, împreună cu bi-functionale deoxy-triphosphates nucleotidici dNTPs.
New masks are used in order to direct coupling at other sites until the desired sequences and lengths of oligos are synthesized. Noi masti sunt utilizate cu scopul de a cuplare directă la alte site-uri, până la lungimea dorită și secvențe de oligos sunt sintetizate.
An Affymetrix chip can have over 500,000 25-mer oligo probes arrayed on a 1.25x1.25 cm slide! Un chip Affymetrix poate avea peste 500.000 25-mer oligo probe aranjate pe un diapozitiv 1.25x1.25 cm!
Anywhere from 10 to 20 different oligo probes are synthesized for each gene to tile from the 3' end of the mRNA. There are oligos that are synthesized as perfect matches (designated PM), and mis-match pairs (MM). Oriunde de la 10 la 20 de probe diferite oligo sunt sintetizate pentru fiecare genă pentru a tile de la 3 'sfârșitul celui de-al mRNA. Există oligos care sunt sintetizate după cum se potrivește perfect (desemnat PM), și mis-meci de perechi (mm).
Each MM pair has a one-base pair mismatch in the centre of the oligo, which allows a control for background noise and allows normalization of cross-hybridization. Fiecare are o pereche MM-o baza de nepotrivire de pereche in centrul de oligo, care permite un control pentru a zgomotului de fond și de normalizare a permite eco-hybridization.
Problems of Short Oligonucleotide DNA Microarrays: Probleme de scurtă Oligonucleotide ADN Microarrays:
- Short oligos have cross-hybridization problems -- Scurt oligos au probleme de eco-hybridization
- Must therefore use many oligo controls for each gene target -- Trebuie, prin urmare, oligo utiliza mai multe controale pentru fiecare țintă de gene