Proteína Microarrays
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Microplaquetas Da Proteína:
A proteína Microarrays pode ser baseada em todo o assay ligand-ligando que confiar na formação do produto com uma molécula immobilized da captação e uma molécula do alvo atuais na solução. Estes assays podem ser miniturized e colocaram em uma microplaqueta microarray da proteína.
Os microarrays da proteína estão transformando-se agora muito popular devido a suas aplicações futuras possíveis no estudo da ácido-proteína, da proteína-proteína, do ligand-ligand-receptor, do alvo da droga-proteína, e de interações nucleic do enzyme-substrate.
Tipos de moléculas da captação para microplaquetas de Microarray da proteína. Para analisar interações da proteína com outras moléculas, os microarrays da proteína podem ter vários tipos de moléculas immobilized na superfície da corrediça para agir como moléculas da captação no assay microarray da proteína.
Figura 1 ilustra a disposição a mais comum da proteína, o antibody microarray. Os antibodies são manchados em uma corrediça de vidro. Dois lysates da pilha com as proteínas etiquetadas com Cy3 e Cy5 (para o exemplo, o cancer contra o normal) são adicionados como uma solução na disposição da proteína. Os sinais são detectados dos dois sinais diferentes. Os dados são computados permitindo uma análise de quanto tinj-etiquetou a proteína que os antibodies em cada ponto estão ligando. Esta informação permite que se determine se a expressão da proteína acima-está regulada no cancer, para baixo-regulado ou unchanged.
Figura 2. a) Demonstra as disposições da proteína que são baseadas na análise microarray de interações do antígeno-antigen-antibody. Os antígenos são manchados nas corrediças de vidro. Antibodies que são ligamento etiquetado aos antígenos e se emitem o sinal fluorescente (mostrado como a estrela amarela) qual pode então ser detectado do ponto na disposição.
b) Mostra um microarray da proteína composto dos pontos qual ato como immunoassays do sanduíche. Os antibodies são manchados nas microplaquetas e o lysate da pilha ou uma solução são aplicados à corrediça. Os antibodies incubated com a solução, com lavagem mais atrasada para remover o emperramento non-specific. Os complexos do sanduíche dados forma emitem-se um sinal detectável do ponto.
c) Uma proteína da interação da proteína-proteína microarray onde as proteínas são manchadas em uma microplaqueta da proteína, e as proteínas etiquetadas são adicionadas à microplaqueta e incubated para determinar onde pode ligar e interagir. Um sinal detectável é emitido dos pontos obrigatórios.
d) Disposição nucleic da interação da Ácido-proteína, (aqui uma microplaqueta da interação da DNA-proteína). Os ácidos nucleic tais como o DNA são manchados em uma corrediça de vidro. Este podia ser locais obrigatórios do transcriptional para o exemplo. As proteínas tais como fatores DNA-ligando fluorescently etiquetados da transcrição na solução são adicionadas à microplaqueta e incubated na disposição. Um sinal detectável é emitido dos pontos do DNA onde as proteínas ligam.
e) Se você mandar um jogo dos ligands e de você querer encontrar os receptors o ligamento a, você pode usar uma microplaqueta da proteína do receptor-ligand-ligand como indicada. As proteínas do receptor são manchadas nas corrediças de vidro. Os ligands etiquetados Fluorescently são adicionados à microplaqueta. Ligar do ligand aos receptors causa a emissão de um sinal detectável que localize os pontos de interação (isto é que a proteína fêz o ligamento do ligand).
f) Testar para o specificity um do enzyme-subrates-subrates pode empregar uma proteína do enzyme-substrate microarray. Esta microplaqueta é composta dos nano-poços do descrete em que os enzymes são limitados. A carcaça é adicionada nos nano-poços e a emissão do sinal é detectada dos nano-poços a fim assay para a função do enzyme.
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