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Notícia do Dna Microarray

Protocolo Básico do Dna Microarray:

 

Os estágios em uma experiência de Microarray:

1. Obtenha A Microplaqueta do Dna Microarray  

Atualmente, sobre 50.000 DNA as pontas de prova podem ser manchadas em uma corrediça de 25X75mm imprimir robotic. É assim possível pôr o elogio humano inteiro do genome usando esta aproximação high-density da disposição (por exemplo disposições de Affymetrix).

Os milhares de pontos distintos de oligos ou de DNAS sabido são imprimidos nas plataformas da matriz situadas no silicone, nas folhas de nylon, ou nas corrediças de vidro.

2. Etiquetar Cy3 e Cy5 de espécimes do RNA usando (RT-PCR) a síntese do DNA

O RNA de 2 ou mais espécimes é comparado.  O RNA de cada espécime é reverso transcrito usando RT-PCR a DNA (DNA complementar). O DNA é etiquetado com as duas tinturas fluorescentes diferentes que são coloridas diferentemente (vermelho e verde), com Cy3 e Cy5.

3. Hybridization de pontas de prova do DNA à disposição do DNA

As pontas de prova do DNA hybridized ao DNA microarray. A disposição do DNA é lavada então.

4. Deteção do sinal do hybridization

Os sinais fluorescentes do hybridization são feitos a varredura e detectados usando dispositivos confocal do laser. Os dados são filtrado e processado.

5. Análise De Dados do Dna Microarray

A análise de dados é conduzida usando ferramentas do DNA Microarray e/ou o software bioinformatic processar de imagem.

Os intesities do sinal dos pontos são correlacionados com as concentrações de amostras do mRNA do alvo. A mineração dos dados é conduzida também usando programas e algoritmos estatísticos determinar se o gene do interesse acima-for regulado, para baixo-regulado, ou unchanged.

Os dados são organizados então usando uma base de dados. A anotação do gene pode então ser executada nos dados, com VAI (análise do ontology do gene), aglomerando a análise (que genes similares e pathways dos grupos junto), e a análise dos pathways e as redes dos genes.